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下載安裝Flash播放器（四）病原體分離培養(yǎng)。
多用HL-60進(jìn)行嗜吞噬細(xì)胞無形體的分離培養(yǎng)。最常用的分離方法是將白細(xì)胞部分接種培養(yǎng)基，然后將100-500μl抗凝血接種到懸浮有2×105或1×106細(xì)胞內(nèi), 每2-3天染色檢查包涵體，一般5-10天可查見包涵體。由于分離可能受到紅細(xì)胞的影響，因此，建議使用以下方法：
1.白細(xì)胞分離：采用密度梯度離心方法（Ficoll-Paque）。一般采用2-3 ml EDTA抗凝血，用2倍體積的無菌Hanks 平衡鹽溶液稀釋，最后采用Histopaque（Sigma，St . louis, Mo）密度梯度離心分離白細(xì)胞，可以獲得較高的白細(xì)胞，用以分離HGA。采用白細(xì)胞分離方法進(jìn)行接種時(shí)，應(yīng)注意防止操作過程中的污染。
2. 紅細(xì)胞裂解后收集白細(xì)胞（NHCl4裂解法）。
3. 在使用含有紅細(xì)胞的標(biāo)本培養(yǎng)后，另加入宿主未感染的細(xì)胞，建立混合培養(yǎng)。
血液白細(xì)胞懸浮于2ml體積、含有5-10%胎牛血清的培養(yǎng)基中，且在25 cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)與培養(yǎng)細(xì)胞作用3小時(shí)。37℃、5% CO2 條件下振搖孵育，可增加病原體與細(xì)胞的作用。
病原體的鑒定：可通過種特異引物進(jìn)行PCR鑒定。
五、生物安全
在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及實(shí)驗(yàn)室工作過程中，生物安全應(yīng)參照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)要求進(jìn)行。
（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全。
標(biāo)本滅活、病原DNA標(biāo)本提取及病原體分離操作應(yīng)在生物安全Ⅱ級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。非感染性材料的檢測可在生物安全I(xiàn)級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
（二）血液標(biāo)本采集安全注意事項(xiàng)。
采集病例的標(biāo)本時(shí)，應(yīng)做好個(gè)人防護(hù)。采集者應(yīng)戴乳膠手套，盡量避免病例的血液外溢或直接接觸。如發(fā)生血液外溢污染環(huán)境時(shí)，應(yīng)及時(shí)采用75%酒精或常用消毒劑進(jìn)行消毒處理。應(yīng)按照對傳染性樣本的要求，對采集標(biāo)本的器具及病人止血棉球及時(shí)進(jìn)行消毒處理。防止銳器扎傷皮膚，一旦發(fā)生，應(yīng)按臨床外科要求，及時(shí)進(jìn)行傷口清創(chuàng)。如直接沾染了臨床診斷病例或確診病例的血液，除及時(shí)消毒皮膚外，應(yīng)口服強(qiáng)力霉素預(yù)防感染，服用劑量參照《人粒細(xì)胞無形體病診療方案（試行）》（附件1）。
（三）采集動(dòng)物宿主與媒介蜱標(biāo)本個(gè)人防護(hù)。
野外采集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)穿著顏色明亮的防護(hù)服，并將衣袖或褲管口扎緊以防蜱叮咬人體，且容易發(fā)現(xiàn)蜱的附著。一旦發(fā)現(xiàn)有蜱附著體表，應(yīng)用鑷子夾取，不要用手直接摘除。野外作業(yè)或活動(dòng)的人員可使用驅(qū)避劑或防蚊油噴涂皮膚，也可用硫化鉀代替防蚊油。
（四）標(biāo)本運(yùn)輸安全注意事項(xiàng)。
應(yīng)參照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)要求（B類）進(jìn)行。
（五）在診療及標(biāo)本的采集、包裝和實(shí)驗(yàn)室檢測等過程中所產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，應(yīng)按照《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》和《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》等相關(guān)規(guī)定處理。